En los últimos años, la inmunohistoquímica multiplex (mIHC), con su capacidad para detectar simultáneamente múltiples marcadores y analizar información espacial, se ha convertido en una herramienta importante para la investigación del microambiente tumoral, la evaluación de la inmunoterapia y los estudios de patología espacial. Sin embargo, comparado con la IHC tradicional, el flujo experimental de mIHC es más complejo. Desde la selección de anticuerpos hasta el diseño de paneles, pasando por la tinción TSA y el análisis de imágenes, cada paso puede afectar el resultado final.

Con el rápido desarrollo de la investigación del microambiente tumoral, la biología espacial y el diagnóstico patológico de precisión, la inmunofluorescencia multiplex (mIHC) se ha convertido en una herramienta importante para el análisis de muestras tisulares. En comparación con la inmunohistoquímica tradicional (IHQ) y la inmunofluorescencia convencional (IF), el mIHC permite la detección simultánea de múltiples marcadores proteicos en la misma sección tisular, lo que facilita la identificación del fenotipo celular, el análisis de localización espacial y los estudios de interacciones célula-célula.

1. Las proteínas adaptadoras multifuncionales denominadas TRAF (factores asociados a receptores de TNF) se unen a receptores superficiales y reclutan proteínas adicionales para formar complejos de señalización multiproteica capaces de promover respuestas celulares.
2. Los miembros de la familia TRAF comparten un dominio carboxiterminal común llamado "dominio TRAF", el cual media las interacciones con las proteínas asociadas; muchos también contienen motivos de dedo zinc/amino terminal.
3. Los primeros TRAF identificados, TRAF1 y TRAF2, fueron descubiertos gracias a sus interacciones con el dominio citoplasmático del receptor 2 de TNF (TNFRII).
4. Los seis TRAF conocidos (TRAF1-6) actúan como proteínas adaptadoras para una amplia gama de receptores de superficie celular y participan en la regulación de la supervivencia, proliferación, diferenciación y respuestas al estrés.

La heterogeneidad de las CAF no está impulsada por variaciones genéticas, como mutaciones génicas o anomalías cromosómicas, sino que depende de la reprogramación transcripcional y el remodelado epigenético, regulados dinámicamente por múltiples factores que incluyen el estado de mutación de las células tumorales, las señales del microambiente, la localización espacial y el estado del huésped. Su plasticidad se manifiesta como diferentes subpoblaciones de CAF que experimentan interconversión fenotípica y funcional con el progreso tumoral y los cambios ambientales, participando ampliamente en todo el proceso de evasión inmune tumoral, remodelado estromal, angiogénesis, infiltración neural y resistencia al tratamiento. Por tanto, analizar sistemáticamente las características estratificadas de la heterogeneidad de CAF, los mecanismos reguladores de la plasticidad y aclarar su papel en la terapia tumoral tiene un valor académico significativo e importancia clínica para el desarrollo de estrategias anti-tumor dirigidas estromales precisas y para superar los cuellos de botella del tratamiento de tumores sólidos.

El traumatismo craneoencefálico (TCE) es un problema de salud mundial que afecta significativamente al paciente así como a su familia. El costo anual total del TCE no fatal en 2016 fue de 40,6 mil millones de dólares en los Estados Unidos. Además de la lesión cerebral aguda, incluso los casos leves pueden llevar a deterioro cognitivo y cambios psiquiátricos a largo plazo. A más largo plazo, los pacientes con TCE muestran menor resiliencia frente a patologías asociadas a enfermedades neurodegenerativas. El tratamiento del TCE se hace más difícil debido a la falta de biomarcadores fiables para detectar el TCE. Varios proteínas son objeto de interés, las cuales son candidatas para medición en sangre tras el TCE. La proteína fibrilar ácida glial (GFAP) es una proteína de filamento intermedio astrocítico. Como proteína del citoesqueleto, la GFAP ayuda a proporcionar soporte estructural a los astrocitos, que brindan soporte metabólico a las neuronas y mantienen la barrera hematoencefálica. El número y tamaño de los astrocitos, en un proceso llamado astrogliosis, también se correlaciona positivamente con la lesión cerebral. Además expresado abundantemente en astrocitos, el S100B se utiliza comúnmente como marcador astrocítico y se correlaciona positivamente con el TCE. El neurofilamento-L (NfL) y tau son parte del citoesqueleto neuronal que proporcionan estructura a los axones. Los axones están cubiertos por una membrana multicapa llamada vaina de mielina. La proteína básica de la mielina (MBP) se encuentra enriquecida en la mielina y ayuda a mantener su estructura. El UCHL1 y el Enolasa-2 son hidrolasas de ubiquitina y enzimas glucolíticas, respectivamente, que se encuentran enriquecidas en neuronas. El PSD95 es una proteína adaptadora enriquecida en sitios postsinápticos en las neuronas. Tras la lesión cerebral, las proteínas enriquecidas en neuronas, así como las proteínas que mantienen la integridad neuronal/axonal, pueden medirse en sangre, reflejando el daño neuronal.

El ciclo del ácido tricarboxílico (CTA) incluye diversas reacciones enzimáticas que constituyen una parte clave de la respiración aeróbica celular. El transporte del producto final glucolítico piruvato hacia las mitocondrias y la descarboxilación del piruvato dentro del CTA generan energía mediante fosforilación oxidativa bajo condiciones aeróbicas. Dos proteínas de la membrana interna mitocondrial, el portador 1 de piruvato mitocondrial (MPC1) y el portador 2 de piruvato mitocondrial (MPC2), forman un complejo de 150 kDa y son proteínas esenciales en el transporte facilitado de piruvato hacia las mitocondrias. La citrato sintasa cataliza la reacción primera y limitante por velocidad del CTA. La aconitasa 2 mitocondrial (ACO2) cataliza la conversión del citrato a isocitrato mediante cis-aconitato. IDH1 e IDH2 son dos de las tres deshidrogenasas de isocitrato que catalizan la descarboxilación oxidativa de isocitrato a α-cetoglutarato (α-KG). IDH1 funciona como supresor de tumores en el citoplasma y los peroxisomas, mientras que IDH2 se encuentra en las mitocondrias e interviene en el CTA. Se han identificado mutaciones en IDH2 también en gliomas malignos. La dihidrolipoamida succiniltransferasa (DLST) es un subunidades del complejo de deshidrogenasa de α-cetoglutarato, un complejo enzimático clave en el CTA. El subunidad A de la deshidrogenasa de succinato (SDHA) es un componente del CTA y de la cadena de transporte de electrones e interviene en la oxidación de succinato. La fumarasa cataliza la conversión de fumarato a malato. La deficiencia de fumarasa lleva al acumulación de fumarato, un oncometabolito que ha demostrado promover la transición epitelial-a-mesenquimal (EMT), un proceso de desarrollo que ha sido implicado en oncogénesis.

mIHC, que significa inmunohistoquímica multiplex, es una tecnología de detección patológica de alto rendimiento y alta resolución espacial que se actualiza de forma iterativa a partir de la inmunohistoquímica tradicional.

Los kits de TSA (Amplificación de Señales de Tiramina) son sistemas de inmunoensayo de alta sensibilidad desarrollados basándose en el principio de la deposición catalizada por enzimas de HRP de moléculas fluorescentes de tiramina. Su mecanismo central consiste en utilizar un anticuerpo secundario marcado con HRP para catalizar la activación de la tiramina fluorescente, provocando su deposición covalente alrededor del antígeno diana, logrando así una enriquecimiento local de alta densidad de fluorescencia y mejorando significativamente la sensibilidad de detección.

El avance iterativo de la tecnología de patología espacial ha superado completamente las limitaciones del diagnóstico patológico tradicional, como los marcadores únicos, las señales débiles y la información espacial ausente, convirtiéndose en una tecnología de apoyo fundamental para el análisis del microambiente tumoral, la investigación de los mecanismos de las enfermedades y el diagnóstico patológico preciso.

A través del análisis integrado de multiómica y la validación experimental multidimensional, este estudio resuelve sistemáticamente los mecanismos centrales mediante los cuales UPP1 media la formación de un microambiente inmunosupresor e impulsa el progreso tumoral en el CAAP, proporcionando una base teórica novedosa para la evaluación del pronóstico del CAAP y la inmunoterapia personalizada.