En los últimos años, en campos de investigación como la inmunología tumoral, las infecciones y la inflamación, así como las neurociencias, un número creciente de comentarios de revisores ha comenzado a incluir una palabra clave común: «información espacial insuficiente». Muchos investigadores se encuentran confundidos: han realizado pruebas de Western blot, qPCR e incluso secuenciación de células simples, y sin embargo aún se les pide complementar con evidencia a nivel espacial. El problema central radica en una transformación importante que están experimentando las ciencias de la vida modernas: el enfoque de la investigación ya no es simplemente «si algo se expresa» o «cuánto se expresa», sino «dónde se expresa» y «con quién coexiste». Este salto cognitivo desde moléculas hacia estructuras ha hecho gradualmente que la información espacial se convierta en una dimensión clave dentro del sistema de evaluación de artículos, y la tecnología de inmunofluorescencia multiplex TSA ha emergido como una herramienta importante para conectar las moléculas con las estructuras tisulares en este contexto.

A diferencia de la inmunotinción fluorescente tradicional, el sistema TSA no solo intensifica la intensidad de fluorescencia, sino que logra la "deposición tisular" de las señales mediante catálisis enzimática, cambiando fundamentalmente la forma de existencia de la señal y la lógica de detección, lo que permite sistemas de detección in situ para tejidos con hasta 5-8 colores o incluso dimensiones superiores.

La Na,K-ATPasa es un dímero integral de membrana que pertenece a la familia de las ATPasas del tipo P. La fosforilación de la Na,K-ATPasa en el residuo Tyr10 se ha relacionado con la regulación de la actividad enzimática en respuesta a hormonas y neurotransmisores. Las cadherinas son una superfamilia de glicoproteínas transmembrana que contienen repeticiones de cadherina de aproximadamente 100 residuos en su dominio extracelular. Las cadherinas median la adhesión célula-célula dependiente de calcio y desempeñan roles críticos en el desarrollo normal de los tejidos. La subfamilia clásica de cadherinas incluye N-, P-, R-, B- y E-cadherina, así como unos diez miembros adicionales que se encuentran en las uniones adherentes, una estructura celular cerca de la superficie apical de las células epiteliales polarizadas. El 4F2hc es una proteína transmembrana que pertenece a la familia de portadores de solutos. El 4F2hc forma complejos heterodiméricos con varios transportadores de aminoácidos, como LAT1 y LAT2, y regula la captación de aminoácidos. Las proteínas integrales de 21-24 kDa, las caveolinas, son los componentes estructurales principales del microdominio de la membrana plasmática enriquecido con colesterol/fosfolípidos llamado caveola. Se han identificado tres miembros de la familia de caveolina (caveolina-1, -2 y -3) con diferentes distribuciones tisulares. La ectonucleotidasa pirofosfatasa-fosfodiesterasa 1 (ENPP1) es una proteína transmembrana de paso simple principalmente implicada en la hidrólisis de ATP en la membrana plasmática. El ENPP1 desempeña roles importantes en la mineralización ósea y la calcificación de tejidos blandos.

Hoy, le proporcionaremos una comprensión integral de esta tecnología revolucionaria desde las perspectivas de los principios técnicos, el flujo experimental, los casos de aplicación y el análisis de ventajas.

En la investigación moderna de ciencias de la vida, la complejidad de los microambientes tisulares plantea mayores demandas para el estudio científico. La tecnología de inmunofluorescencia multiplex (mIHC), con sus ventajas de detección simultánea de múltiples objetivos y preservación de información espacial, se ha convertido en una herramienta indispensable en campos como la inmunología tumoral, las neurociencias y la investigación de células madre.

En las últimas décadas, la inmunohistoquímica (IHC) ha sido la herramienta estándar para la investigación del tejido tumoral: desde HER2 y Ki-67 hasta PD-L1, ha permitido a investigadores y patólogos visualizar claramente la distribución de proteínas individuales en los tejidos. Sin embargo, con la entrada de la investigación del cáncer en la "era de la biología espacial", la información proporcionada por marcadores únicos está lejos de ser suficiente.

Este estudio combinó la tinción por pasos secuenciales con tecnología de detección de amplificación por tiramida, estableciendo exitosamente un sistema de tinción inmunofluorescente multiplex adecuado para plataformas de tinción completamente automatizadas, superando así la barrera técnica que impide a las tinciones automatizadas tradicionales el uso de anticuerpos primarios de la misma especie para detección multianálisis.

Este artículo detalla el mecanismo de activación, la modificación por fosforilación de proteínas clave y la regulación transcripcional de la vía de señalización NF-κB. En el citoplasma, NF-κB permanece inactivo al unirse a las proteínas inhibidoras IκB. El complejo IKK fosforila IκBα, IκBβ e IκBε, desencadenando su ubiquitinación y degradación proteosómica. Los dímeros de NF-κB liberados luego se translocan al núcleo para ejecutar funciones transcripcionales. La familia de NF-κB en mamíferos está compuesta por cinco miembros: p65/RelA, c-Rel, RelB, NF-κB1 y NF-κB2. Tras el procesamiento proteolítico, las proteínas precursoras forman dímeros con proteínas Rel para unirse al ADN. Múltiples sitios de fosforilación modulan la actividad transcripcional de p65. Este documento también lista anticuerpos comerciales para investigaciones sobre esta vía, junto con su reactividad en especies y técnicas experimentales aplicables, así como referencias relevantes, proporcionando una guía para investigación básica y detección experimental de la vía NF-κB.

La familia de factores nucleares κB (NF-κB) participa extensamente en las respuestas inflamatorias e inmunológicas. Distintamente del pathway canónico de NF-κB activado por TNFα y LPS, el pathway no canónico es desencadenado por BAFF, CD40L y otros estimulos. Este pathway se basa en la quinasa inducida por NF-κB (NIK) e IKKα para mediar la fosforilación y la degradación proteasomal parcial de p100 de NF-κB2 en p52 activo. TRAF2 y TRAF3 actúan como reguladores negativos en este proceso. El pathway no canónico de NF-κB es esencial para la maduración de células B, la formación de tejidos linfoides periféricos y la prevención de enfermedades autoinmunes. Este artículo también lista una serie de anticuerpos específicos para detección de proteínas relacionadas, junto con referencias de investigación relevantes.

¿Cuáles son las diferencias entre la inmunohistoquímica tradicional (IHC) y la inmunohistoquímica multiplexada (mIHC)?

La principal diferencia radica en el número de marcadores que pueden analizarse simultáneamente en una misma muestra de tejido. La IHC convencional permite visualizar un solo marcador o, como máximo, dos por sección, mientras que la mIHC tiene la capacidad de detectar y cuantificar múltiples proteínas (generalmente entre 4 y 10) al mismo tiempo utilizando canales espectrales.

¿Por qué están eligiendo cada vez más estudios el uso de la mIHC?

Motivo principal es la necesidad de caracterizar la heterogeneidad tumoral y el microambiente tumoral (TME) con mayor precisión. La mIHC permite:

• Economizar muestras biológicas valiosas al obtener información multidimensional en una sola sección.
• Análisis cuantitativo preciso de la abundancia celular y su expresión proteica.
• Inferencia espacial de las interacciones entre diferentes tipos celulares (células inmunitarias, células tumorales, fibroblastos), lo cual es crucial para entender la biología del cáncer y desarrollar inmunoterapias.