Las proteínas GATA comprenden un grupo de factores de transcripción relacionados por la presencia de dominios de unión al ADN de dedo de zinc conservados, que se unen directamente al elemento central de secuencia nucleotídica GATA. Existen seis proteínas GATA vertebradas, designadas GATA-1 a GATA-6. Aunque comúnmente se dividen en factores hematopoyéticos (GATA-1-3) o cardíacos (GATA-4-6), las proteínas GATA se expresan en una amplia variedad de tejidos y desempeñan roles críticos en el desarrollo embrionario y la diferenciación orgánica.

Basado en este cuello de botella central, la investigación "In situ staining with antibodies cross-reactive in pigs, cattle, and white-tailed deer facilitates understanding of biological tissue status and immunopathology" desarrolló un esquema de inmunohistoquímica cromogénica múltiple para el estudio comparativo de células inmunitarias en ganglios linfáticos entre especies, y verificó la capacidad de la tinción fluorescente múltiple para detectar señales de co-localización de proteínas en tejidos porcinos. Dada la escasez y la dificultad de preparación de anticuerpos reactivos a proteínas en animales, la investigación propuso además diseñar inmunorreactivos dirigidos a dianas in situ mediante diseño a nivel de ARN y combinarlos con la tinción de anticuerpos de especies en combinaciones múltiples para superar las limitaciones de los inmunorreactivos en la detección in situ. Para confirmar el papel de la detección combinada de ARN y proteína en la elucidación del estado tisular y la inmunopatología, la investigación logró la tinción combinada de marcadores proteicos específicos de células con ARN del virus Seneca A (SVA) en tejido de tonsila porcina.

El carcinoma de células de Merkel (CCM) es un carcinoma neuroendocrino cutáneo agresivo que afecta principalmente a adultos mayores. La incidencia es mayor y ocurre más tempranamente en personas inmunocomprometidas, con una alta tasa de recurrencia, metástasis y mortalidad, lo que requiere evaluaciones pronósticas y enfoques de tratamiento efectivos. El CCM se desarrolla a través de dos vías distintas: la mayoría de los tumores son impulsados por la integración clonal del poliovirus de células de Merkel (MCPyV) y la expresión de antígenos T virales oncogénicos; los tumores negativos para MCPyV surgen debido a una alta carga mutacional tumoral inducida por la radiación ultravioleta. Los predictores tradicionales de respuesta a la inmunoterapia (como la expresión de PD-L1 y la carga mutacional tumoral) son ineficaces para el CCM, mientras que el análisis detallado del microambiente tumoral (MAT) puede predecir la respuesta al tratamiento de manera más efectiva. La comprensión profunda del MAT asociado al CCM puede proporcionar nuevas estrategias de tratamiento alternativas para pacientes a los que la inmunoterapia no es efectiva o son intolerantes a ella.

El microambiente inmunológico tumoral (TME) del cáncer colorrectal contiene biomarcadores clave para las respuestas inmunitarias antitumorales del huésped y los mecanismos de escape inmunitario tumoral. Se ha demostrado que la densidad de subpoblaciones de células T como las células T CD3⁺ y CD8⁺ predice con mayor precisión el riesgo de recurrencia de la enfermedad que la estadificación histopatológica tradicional. Además, las células T de memoria residentes en tejido que expresan CD103 desempeñan roles importantes en la inmunidad antitumoral del cáncer colorrectal y otros tumores, y su densidad se correlaciona con los resultados oncológicos a largo plazo. Por lo tanto, la caracterización precisa del fenotipo, la función y la distribución espacial de las células inmunitarias en el TME es crucial para descubrir nuevos marcadores pronósticos y guiar estrategias inmunoterapéuticas.

En el campo del tratamiento del glioma, el desarrollo de la inmunoterapia ha estado limitado durante mucho tiempo por un entendimiento poco claro del microambiente inmunológico tumoral. Como el tumor maligno más agresivo del sistema nervioso central, los gliomas, particularmente el glioblastoma (GBM), han sido etiquetados durante mucho tiempo como tumores "inmunológicamente fríos". Barreras como la barrera hematoencefálica que dificultan la infiltración de células inmunológicas, la alta expresión de moléculas de punto de control inmunológico como PD-L1 por parte de las células tumorales y el enriquecimiento de células inmunosupresoras como los macrófagos M2 contribuyen a una tasa de respuesta clínica inferior al 15% para terapias como los inhibidores del punto de control inmunológico.

Las estructuras linfoides terciarias (TLS) son agregados linfoides ectópicos que pueden desarrollarse dentro o adyacentes a los tumores, activando la inmunidad antitumoral. Su estado de madurez está estrechamente relacionado con la eficacia inmunoterapéutica y la supervivencia de los pacientes, lo que las convierte en marcadores pronósticos muy prometedores. La tecnología de inmunofluorescencia múltiple (mIF) Opal-TSA, con su alta sensibilidad y flexibilidad de tinción, se ha convertido en una elección ideal para superar estos cuellos de botella.

La inmunofluorescencia múltiple combinada con la tecnología de amplificación de señal de tiramida (TSA), basada en el principio de amplificación en cascada de señal enzimática, ha superado las limitaciones de los métodos tradicionales en sensibilidad y detección de múltiples objetivos, y su investigación aplicada en el campo del diagnóstico patológico tumoral ha mostrado un crecimiento explosivo en los últimos años.

En los últimos años, los regímenes de quimioterapia combinada con inhibidores de puntos de control inmunológico han mejorado significativamente el pronóstico de algunos pacientes con cáncer de mama triple negativo (TNBC), pero los biomarcadores existentes tienen limitaciones obvias. Las diferencias en el número de clones de anticuerpos en los kits comerciales de detección de PD-L1 conducen a umbrales de detección inconsistentes, y el uso exclusivo de "tasa de positividad de células inmunológicas >1%" como criterio de juicio no puede distinguir los tipos de células que expresan PD-L1, lo que resulta en una precisión limitada en el cribado de pacientes con una tasa de respuesta de solo 8%-20%. Por lo tanto, el uso de la tecnología de inmunofluorescencia múltiple TSA para analizar las características de expresión de PD-L1 en diferentes células inmunológicas se ha convertido en una dirección clave para optimizar la estratificación de pacientes con TNBC y las decisiones de tratamiento.

La composición celular, el estado funcional y la distribución espacial del microambiente inmunológico tumoral (TME) son factores fundamentales que determinan la progresión tumoral y la eficacia de la inmunoterapia. El análisis preciso de las características del TME se ha convertido en una dirección clave en la investigación tumoral. Sin embargo, las herramientas de investigación tradicionales tienen limitaciones significativas: la inmunohistoquímica simple (IHC) solo puede detectar un único objetivo, no mostrando las interacciones entre células; la citometría de flujo permite el análisis multiparamétrico pero requiere la disociación celular, perdiendo información espacial crucial; las primeras técnicas de tinción fluorescente múltiple estaban limitadas por una baja intensidad de señal y una mala compatibilidad de especies de anticuerpos, lo que las hacía difíciles de adaptar a las necesidades de análisis de muestras clínicas. En este contexto, ha surgido una plataforma de inmunofluorescencia múltiple (mIHC) basada en la tecnología de amplificación de señal de ti ramida (TSA), que ofrece la posibilidad de un análisis "panorámico" del TME. El equipo de Viratham Pulsawatdi A publicó un estudio titulado "A robust multiplex immunofluorescence and digital pathology workflow for the characterisation of the tumour immune microenvironment" en Molecular Oncology. Este estudio tomó como objeto de investigación tejidos de cáncer colorrectal (CCR) fijados en formalina e incluidos en parafina (FFPE), y basándose en la plataforma de inmunofluorescencia múltiple Opal de la tecnología TSA, construyó y verificó un flujo de trabajo estandarizado desde la tinción hasta el análisis de imágenes, proporcionando un método fiable para la caracterización precisa del microambiente inmunológico tumoral. A continuación se presenta un análisis en profundidad desde los aspectos de esencia técnica, lógica experimental, hallazgos centrales y valor de aplicación.

Los colorantes fluorescentes de los kits TSA de Enklife tienen excelentes propiedades anti-decolorantes, por lo que no es necesario evitar la luz bajo lámparas fluorescentes, ni operar en un entorno oscuro durante el uso. Sin embargo, evite exponer directamente el kit a la luz solar. Las diapositivas teñidas suelen poder almacenarse a 4℃ durante 6 a 12 meses.