Formulaciones Comunes de Reactivos de Inmunohistoquímica (IHC)
Formalina Neutral Bufferada al 10% (10% NBF)
4% de Formaldehído (p/p), 0.01 M Fosfato
Formulación (1 L)
| Componente | Cantidad |
|---|---|
| Solución de stock de formaldehído al 40% | 100 mL |
| NaH₂PO₄·H₂O | 0.4 g |
| Na₂HPO₄ | 0.65 g |
| Agua desionizada | Añadir hasta 1 L |
pH:
7.2-7.4 (ajustado con NaOH o HCl)
Almacenamiento:
1 mes a temperatura ambiente; hasta 3 meses a 4°C
Uso:
Buffer Citrato 0.01 M
10 mM Citrato Trisódico, 1.8 M Ácido Cítrico
Formulación (500 mL)
| Componente | Cantidad |
|---|---|
| Citrato Trisódico 0.1 M | 9 mL |
| Ácido Cítrico 0.1 M | 41 mL |
| Agua desionizada | Añadir hasta 500 mL |
pH:
6.0 ± 0.05
Almacenamiento:
1 mes a 4°C
Uso:
Solución de Metanol con H₂O₂ al 3%
H₂O₂ al 3% (v/v)
Formulación (10 mL, preparar fresco)
| Componente | Cantidad |
|---|---|
| H₂O₂ al 30% | 1 mL |
| Metanol | 9 mL |
Uso:
Nota: Este reactivo debe prepararse fresco antes de su uso
Suero Normal al 5% (del mismo especie que el anticuerpo secundario)
al 5% (v/v)
Formulación (1 mL)
| Componente | Cantidad |
|---|---|
| Suero normal | 50 μL |
| PBS | 950 μL |
Uso:
PBS-BT
1% BSA, 0.05% Tween-20
Formulación (100 mL)
| Componente | Cantidad |
|---|---|
| BSA | 1 g |
| Tween-20 | 50 μL |
| PBS | Añadir hasta 100 mL |
Almacenamiento:
Uso:
Solución de Trabajo DAB-H₂O₂
DAB al 0.5 mg mL⁻¹, H₂O₂ al 0.003%
Formulación (5 mL, preparar fresco)
| Componente | Cantidad |
|---|---|
| Solución de stock de DAB (50 mg/100 mL TB, pH 7.6, filtrada al 0.22 μm) | 5 mL |
| H₂O₂ al 30% | 5 μL |
Uso:
Nota: Este reactivo debe prepararse fresco antes de su uso
Hematoxilina Harris
0.4% Hematoxilina (p/p), 0.08% Óxido de Mercurio
Formulación (500 mL)
| Componente | Cantidad |
|---|---|
| Hematoxilina | 2 g |
| Etilanol absoluto | 20 mL |
| Sulfato de aluminio potásico | 40 g |
| Agua desionizada | 480 mL |
| Óxido de mercurio | 1 g (añadir lentamente con agitación minuciosa) |
Preparación:
Filtrar, dejar reposar para madurar durante 24 h
Almacenamiento:
6 meses a temperatura ambiente en botella marrón
Uso:
Buffers
PBS (0.01 M, pH 7.4)
| Componente | Cantidad (1 L) |
|---|---|
| NaCl | 8.0 g |
| KCl | 0.2 g |
| Na₂HPO₄·12H₂O | 2.9 g |
| KH₂PO₄ | 0.2 g |
| Agua desionizada | 1 L |
Preparación:
Autoclavar, almacenar a temperatura ambiente
TBS-T (0.05 M Tris, 0.15 M NaCl, 0.05% Tween-20, pH 7.6)
| Componente | Cantidad (1 L) |
|---|---|
| Tris base | 6.05 g |
| NaCl | 8.8 g |
| Agua desionizada | 900 mL → ajustar pH a 7.6 → añadir hasta 1 L |
| Tween-20 | 0.5 mL |
