Kit de Inmunohistoquímica Multiplex mIHC TSA

Kit de Inmunohistoquímica Multiplex mIHC TSA

En los campos de la investigación biomédica y el diagnóstico clínico, capturar con precisión los niveles de expresión y la distribución espacial de las proteínas en muestras biológicas es un prerrequisito clave para comprender los mecanismos de la enfermedad y optimizar los planes de tratamiento. Aunque las técnicas tradicionales de inmunohistochemistry sirven como métodos básicos de detección, a menudo enfrentan desafíos como señales débiles, especificidad insuficiente y capacidad de etiquetado limitada al detectar objetivos de baja abundancia o realizar análisis multiplex simultáneo. La tecnología TSA (Amplificación de Señal por Tiaramida), con su único mecanismo de amplificación enzimática, rompe los cuellos de botella de las técnicas tradicionales. El kit TSA desarrollado sobre esta tecnología transforma principios técnicos complejos en herramientas experimentales estandarizadas y fáciles de operar, llevando detección multicolor de alta sensibilidad y alta especificidad a laboratorios ordinarios. Desde secciones de parafina, tejidos congelados hasta muestras celulares y organoides, el kit TSA desempeña un papel irremplazable en la investigación de proteómica espacial, análisis del microambiente inmune tumoral, diagnóstico patológico preciso clínico y otros campos con su amplia adaptabilidad a las muestras y rendimiento de detección estable.

Nuestro kit TSA tiene componentes del producto completos, incluyendo fluoróforos etiquetados con TSA, tampón de dilución TSA, 3% H₂O₂, solución de bloqueo, tampón de dilución de anticuerpos, tampón de elución de anticuerpos, HRP-cabra anti-conejo/ratón IgG, solución de tinción DAPI y medio de montaje anti-extinción fluorescente, proporcionando a los usuarios una solución experimental todo en uno y aumentando enormemente la conveniencia experimental. El kit está equipado con sustratos fluorescentes de 7 colores que cubren el rango de longitud de onda 480–750 nm, que pueden combinarse libremente según sea necesario para lograr la adquisición simultánea de información multiplex de 7 vías en una sola sección. Al mismo tiempo, los anticuerpos secundarios de apoyo son compatibles con anticuerpos primarios multi-especie conejo/ratón, rompiendo las limitaciones tradicionales de especie. Combinado con un tampón de elución de anticuerpos desarrollado específicamente y suave, puede eliminar anticuerpos mientras preserva antígenos y señales fluorescentes, permitiendo 5–7 rondas de tinción cíclica manteniendo la integridad estructural del tejido, reduciendo significativamente el daño a las muestras comparado con la reparación por calor microondas. Como kit universal, tiene una amplia gama de aplicaciones y puede adaptarse a secciones de parafina, secciones congeladas, extendidos celulares y otras muestras tisulares, y con soporte técnico profesional y sistemas de garantía de calidad, los usuarios pueden recibir soluciones oportunas y efectivas para diversos problemas encontrados durante el uso.

Tabla 1. Tintes Fluorescentes para Detección de Inmunohistoquímica Multiplex

Tabla 2. Componentes del Kit TSA Completo

Procedimiento de Operación del Kit (Secciones de Parafina como Ejemplo):

1. Desparafinado: Sumergir las secciones secuencialmente en Xileno 1 (15min), Xileno 2 (15min), Etanol Absoluto 1 (5min), Etanol Absoluto 2 (5min), Etanol 95% (5min), Etanol 85% (5min), 75% Etanol (5min) y finalmente enjuagar los portaobjetos con agua.

2. Recuperación de Antígeno: Usar típicamente tampon Citrato 1× (pH 6.0) como solución de recuperación para recuperación a alta temperatura y presión. Colocar las secciones en una olla de presión, añadir cantidad apropiada de solución de recuperación, cerrar la olla de presión, iniciar el tiempo por 2min después de que sube el vapor, enfriar a temperatura ambiente para completar la recuperación. [Para objetivos con expresión débil, puede usarse EDTA (pH 9.0) como solución de recuperación. Para tejidos propensos al desprendimiento como tejidos óseos y cerebrales, se recomienda la recuperación por microondas, controlando la temperatura de recuperación alrededor de 80°C, y tampon Citrato 2× (pH 6.0) como solución de recuperación.]

3. Bloqueo de Enzima Endógena: Preparar solución 3% H2O2 con agua pura, colocar las secciones en la solución e incubar a temperatura ambiente por 20min. Para tejidos propensos al desprendimiento, la concentración de H2O2 y el tiempo de incubación pueden reducirse apropiadamente.

4. Bloqueo: Añadir solución de bloqueo gota a gota sobre el tejido e incubar a 37°C por 30min.

5. Incubación de Anticuerpo Primario: Diluir el anticuerpo primario a concentración apropiada usando tampón de dilución de anticuerpos, añadir el anticuerpo gota a gota sobre el tejido e incubar durante la noche a 4°C o por 1h a 37°C.

6. Incubación de Anticuerpo Secundario: Añadir anticuerpo secundario etiquetado con HRP gota a gota sobre el tejido e incubar a 37°C por 1h.

7. Incubación de Reactivo TSA: Añadir tintes fluorescentes TSA-XXX gota a gota sobre el tejido, incubar a 37°C por 30min, luego enjuagar con PBST 3 veces, 5min cada vez.

8. Elución de Anticuerpo: Añadir tampón de elución de anticuerpos gota a gota sobre el tejido e incubar a temperatura ambiente por 15min (incubación a 37°C es mejor).

9. Repetir pasos 4-8 (para incubar otros tintes TSA-XXX fluorescentes).

10. Tinción Nuclear con DAPI: Añadir solución de trabajo DAPI gota a gota sobre el tejido, incubar a temperatura ambiente por 5min, luego enjuagar con PBS 3 veces, 5min cada vez. Secar al centrifugar el líquido, añadir medio anti-extinción fluorescente gota a gota sobre el tejido, cubrir con un portaobjetos y observar y fotografiar bajo microscopio.

Notas Experimentales

1. Se prefieren anticuerpos monoclonales como anticuerpos primarios, seguidos de anticuerpos policlonales. Para muestras de ratón, evitar elegir anticuerpos primarios derivados de ratón lo más posible. Si se eligen anticuerpos primarios de ratón, los anticuerpos secundarios se unirán no solo a los anticuerpos primarios sino también al IgG endógeno en el tejido, resultando en tinción inespecífica.

2. Si el tejido se desprende fácilmente, la reparación puede realizarse usando un método de baño maría a 60°C.

3. Comparado con anticuerpos secundarios fluorescentes, el kit TSA tiene mayor sensibilidad y señales más fuertes. Por lo tanto, la concentración de anticuerpo primario necesita ser reducida,

generalmente aumentando apropiadamente el ratio de dilución basado en el ratio de dilución recomendado en las instrucciones del anticuerpo para reducir la fluorescencia de fondo causada por unión inespecífica. Se recomienda establecer una concentración gradiente de anticuerpo primario para obtener los mejores resultados.

4. Si la fluorescencia de fondo es fuerte, se recomienda añadir un paso de quenching de autofluorescencia tisular.

5. Para asegurar el efecto de elución de anticuerpo y el efecto de etiquetado multiplex fluorescente, se recomienda realizar pruebas individuales de etiqueta simple TSA para cada anticuerpo antes del etiquetado multiplex formal, y determinar las condiciones experimentales como condiciones de reparación de antígeno y secuencia de anticuerpos para etiquetado multiplex basado en los resultados de la prueba de etiqueta simple después de confirmar que cada anticuerpo puede producir ideales positivos de etiqueta simple.

6. Si algunos anticuerpos tienen alto título y afinidad fuerte y no se eluyen completamente fácilmente, puede aumentarse el número de pasos de elución.

7. El tampón de elución de anticuerpos tiene alta fluidez. Si los portaobjetos no se colocan horizontalmente, el reactivo puede fluir fuera del círculo, afectando el efecto de elución. Prestar atención a mantener los portaobjetos planos durante la operación.

Tabla 3. Productos Relacionados

Además, proveemos servicios de etiquetado TSA completos. Podemos seleccionar la mejor tecnología de detección basada en abundancia del objetivo y usar la longitud de onda más adecuada para detectar para coincidir con tus experimentos multicolor. 

Visualización de Resultados Seis-Label Siete-Colores:

Riñón de Ratón (Seis-Label Siete-Colores) — 10x

Cerebro de Ratón (Seis-Label Siete-Colores) — 5x