CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES
| Nombre completo | Factor de necrosis tumoral alfa |
|---|---|
| Sinónimo | DIF;TNF-alpha;TNFA;TNFSF2; |
| Tipo de ensayo | Sándwich |
| Reactividad | Rata |
| Rango | 15.63-1000pg/mL |
| Sensibilidad | 9.38pg/mL |
| Tipo de muestra | Suero, plasma y otros fluidos biológicos |
| Volumen de muestra | 100μL |
| Longitud de onda de detección | OD450 |
| Temperatura de transporte | 2-8°C |
| Especificidad | El kit detectó TNF-α de rata en las muestras y no se encontraron reacciones significativas entre especies. |
| Microplaca | 96-wells plate breakable into 12 x 8 wells strip |
PRINCIPIO DEL ENSAYO
| Este kit ELISA utiliza el principio Sandwich-ELISA. La microplaca ELISA proporcionada en este kit ha sido pre-recubierta con un anticuerpo específico para TNF-α de rata. Los estándares o muestras se añaden a los pocillos de la microplaca ELISA y se combinan con el anticuerpo específico. Luego, un anticuerpo de detección biotinilado específico para TNF-α de rata y un conjugado de avidina-peroxidasa de rábano picante (HRP) se añaden sucesivamente a cada pocillo de la microplaca y se incuban. Los componentes libres se lavan. La solución de sustrato se añade a cada pocillo. Solo los pocillos que contienen TNF-α de rata, anticuerpo de detección biotinilado y conjugado de avidina-HRP aparecerán de color azul. La reacción enzima-sustrato finaliza mediante la adición de la solución de parada y el color se vuelve amarillo. La densidad óptica (DO) se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm ± 2 nm. El valor de DO es proporcional a la concentración de TNF-α de rata. Puede calcular la concentración de TNF-α de rata en las muestras comparando la DO de las muestras con la curva estándar. |
COMPONENTES DEL KIT ELISA
Al recibirlo, desempacar rápidamente y almacenar según lo recomendado en las instrucciones.
| Componentes | Especificaciones | Almacenamiento y notas |
|---|---|---|
| Microplaca | 96T: 8 wells×12 strips 48T: 8 wells×6 strips | No abierto: -20°C, 12 meses No utilizado: Devolverlo a la bolsa de papel aluminio y sellarla, almacenar a -20°C. |
| Estándar de referencia | 96T: 2 vials 48T: 1 vial | No abierto: -20°C, 12 meses Por favor, utilice estándares recién disueltos para cada experimento. Deseche cualquier estándar no utilizado después de la disolución. |
| Concentrado de anticuerpo de detección biotinilado (100×) | 96T: 120μL×1 vial 48T: 60μL×1 vial | No abierto: -20°C, 12 meses No utilizado: Por favor, sellar el concentrado y almacenarlo a -20°C, y desechar la solución de trabajo. |
| Concentrado de conjugado HRP (100×) | 96T: 120μL×1 vial 48T: 60μL×1 vial | No abierto: -20°C (Proteger de la luz), 12 meses No utilizado: Por favor, sellar el concentrado y almacenarlo a -20°C, y desechar la solución de trabajo. |
| Diluyente de anticuerpo de detección biotinilado | 14mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Diluyente de conjugado HRP | 14mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Diluyente de estándar de referencia y muestra | 20mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Concentrado de tampón de lavado (25×) | 30mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Reactivo sustrato (TMB) | 10mL×1 | 2-8°C (Proteger de la luz), 12 meses |
| Solución de parada | 7mL×1 | 2-8°C/Temperatura ambiente |
PROCEDIMIENTOS DEL ENSAYO
DATOS TÍPICOS
Rata TNF-α Curva estándar ELISA
Los datos típicos son solo para referencia y las curvas deben volver a trazarse para cada experimento. Se recomienda la función logística para el ajuste.
PRECISIÓN
Precisión intra-ensayo (Precisión dentro de un ensayo): Se probaron tres muestras de concentración conocida veinte veces en una placa para evaluar la precisión intra-ensayo.
Precisión inter-ensayo (Precisión entre ensayos): Se probaron tres muestras de concentración conocida en veinte ensayos separados para evaluar la precisión inter-ensayo. Los ensayos fueron realizados por al menos tres técnicos utilizando dos lotes de componentes.
| Precisión intra-ensayo | Precisión inter-ensayo | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Muestra | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Media (pg/mL) | 55.31 | 125.06 | 442.59 | 53.19 | 135.57 | 463.33 |
| Desviación estándar | 3.43 | 5.13 | 19.65 | 2.74 | 7.97 | 16.54 |
| CV(%) | 6.21 | 4.1 | 4.44 | 5.16 | 5.88 | 3.57 |
RECUPERACIÓN
Se evaluó la recuperación de Rata TNF-α adicionado en tres niveles diferentes en muestras a lo largo del rango del ensayo en varias matrices.
| Tipo de muestra | Rango (%) | Recuperación promedio (%) |
|---|---|---|
| Suero(n=8) | 88-99 | 93 |
| Plasma EDTA (n=8) | 94-108 | 101 |
| Medio de cultivo celular (n=8) | 93-110 | 101 |
LINEALIDAD
Para evaluar la linealidad del ensayo, las muestras que contenían y/o estaban adicionadas con altas concentraciones de Rata TNF-α en varias matrices se diluyeron con el diluyente de estándar de referencia y muestra para producir muestras con valores dentro del rango dinámico del ensayo.
Pathways associated with ELISA Kit
| Adipocytokine Signaling Pathway | Adipocytokine Signaling Pathway |
| Adipogenesis Pathway | Adipogenesis Pathway |
| African Trypanosomiasis Pathway | African Trypanosomiasis Pathway |
| Allograft Rejection Pathway | Allograft Rejection Pathway |
| Alzheimer's Disease Pathway | Alzheimer's Disease Pathway |
| Amoebiasis Pathway | Amoebiasis Pathway |
Diseases associated with TNF ELISA Kit
| Necrosis | publications with TNF and Necrosis |
| Inflammation | publications with TNF and Inflammation |
| Vascular Diseases | publications with TNF and Vascular Diseases |
| Lung Diseases | publications with TNF and Lung Diseases |
| Liver Diseases | publications with TNF and Liver Diseases |
| Insulin Resistance | publications with TNF and Insulin Resistance |
| Fibrosis | publications with TNF and Fibrosis |
| Atherosclerosis | publications with TNF and Atherosclerosis |
| Colitis | publications with TNF and Colitis |
| Pain | publications with TNF and Pain |
Organs/Tissues associated with TNF ELISA Kit
| Blood | publications with TNF and Blood |
| Prostate | publications with TNF and Prostate |
