CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES
| Nombre completo | 15-lipoxigenasa-2 |
|---|---|
| Sinónimo | ALOX15B; LOX15B; 15-LOX-2; Arachidonate 15-lipoxygenase type II; Lipoxygenase 15, Type B; 15-lipoxygenase 2; Linoleate 13-lipoxygenase 15-LOb Arachidonate-15-Lipoxygenase, Type B |
| Tipo de ensayo | Sándwich |
| Reactividad | Humano |
| Rango | 0.15-10ng/mL |
| Sensibilidad | 0.06ng/mL |
| Tipo de muestra | Suero, plasma y otros fluidos biológicos |
| Volumen de muestra | 100μL |
| Longitud de onda de detección | OD450 |
| Temperatura de transporte | 2-8°C |
| Especificidad | El kit detectó 15-LO-2 humano en las muestras y no se encontraron reacciones significativas entre especies. |
| Microplaca | 96-wells plate breakable into 12 x 8 wells strip |
PRINCIPIO DEL ENSAYO
| Este kit ELISA utiliza el principio Sandwich-ELISA. La microplaca ELISA proporcionada en este kit ha sido pre-recubierta con un anticuerpo específico para 15-LO-2 humano. Los estándares o muestras se añaden a los pocillos de la microplaca ELISA y se combinan con el anticuerpo específico. A continuación, se añaden sucesivamente un anticuerpo de detección biotinilado específico para 15-LO-2 humano y un conjugado de avidina-peroxidasa de rábano picante (HRP) a cada pocillo de la microplaca y se incuba. Los componentes libres se eliminan por lavado. La solución de sustrato se añade a cada pocillo. Solo los pocillos que contienen 15-LO-2 humano, anticuerpo de detección biotinilado y conjugado de avidina-HRP aparecerán de color azul. La reacción enzima-sustrato finaliza mediante la adición de la solución de parada y el color se vuelve amarillo. La densidad óptica (DO) se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm ± 2 nm. El valor de DO es proporcional a la concentración de 15-LO-2 humano. Puede calcular la concentración de 15-LO-2 humano en las muestras comparando la DO de las muestras con la curva estándar. |
COMPONENTES DEL KIT ELISA
Al recibirlo, desempacar rápidamente y almacenar según lo recomendado en las instrucciones.
| Componentes | Especificaciones | Almacenamiento y notas |
|---|---|---|
| Microplaca | 96T: 8 wells×12 strips 48T: 8 wells×6 strips | No abierto: -20°C, 12 meses No utilizado: Devolverlo a la bolsa de papel aluminio y sellarla, almacenar a -20°C. |
| Estándar de referencia | 96T: 2 vials 48T: 1 vial | No abierto: -20°C, 12 meses Por favor, utilice estándares recién disueltos para cada experimento. Deseche cualquier estándar no utilizado después de la disolución. |
| Concentrado de anticuerpo de detección biotinilado (100×) | 96T: 120μL×1 vial 48T: 60μL×1 vial | No abierto: -20°C, 12 meses No utilizado: Por favor, sellar el concentrado y almacenarlo a -20°C, y desechar la solución de trabajo. |
| Concentrado de conjugado HRP (100×) | 96T: 120μL×1 vial 48T: 60μL×1 vial | No abierto: -20°C (Proteger de la luz), 12 meses No utilizado: Por favor, sellar el concentrado y almacenarlo a -20°C, y desechar la solución de trabajo. |
| Diluyente de anticuerpo de detección biotinilado | 14mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Diluyente de conjugado HRP | 14mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Diluyente de estándar de referencia y muestra | 20mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Concentrado de tampón de lavado (25×) | 30mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Reactivo sustrato (TMB) | 10mL×1 | 2-8°C (Proteger de la luz), 12 meses |
| Solución de parada | 7mL×1 | 2-8°C/Temperatura ambiente |
PROCEDIMIENTOS DEL ENSAYO
DATOS TÍPICOS
Humano 15-LO-2 Curva estándar ELISA
Los datos típicos son solo para referencia y las curvas deben volver a trazarse para cada experimento. Se recomienda la función logística para el ajuste.
PRECISIÓN
Precisión intra-ensayo (Precisión dentro de un ensayo): Se probaron tres muestras de concentración conocida veinte veces en una placa para evaluar la precisión intra-ensayo.
Precisión inter-ensayo (Precisión entre ensayos): Se probaron tres muestras de concentración conocida en veinte ensayos separados para evaluar la precisión inter-ensayo. Los ensayos fueron realizados por al menos tres técnicos utilizando dos lotes de componentes.
| Precisión intra-ensayo | Precisión inter-ensayo | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Muestra | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Media (ng/mL) | 0.49 | 1.49 | 4.88 | 0.51 | 1.56 | 5.29 |
| Desviación estándar | 0.03 | 0.09 | 0.22 | 0.03 | 0.07 | 0.27 |
| CV(%) | 6.88 | 5.93 | 4.41 | 5.41 | 4.52 | 5.11 |
RECUPERACIÓN
Se evaluó la recuperación de Humano 15-LO-2 adicionado en tres niveles diferentes en muestras a lo largo del rango del ensayo en varias matrices.
| Tipo de muestra | Rango (%) | Recuperación promedio (%) |
|---|---|---|
| Suero(n=8) | 87-100 | 93 |
| Plasma EDTA (n=8) | 93-105 | 98 |
| Medio de cultivo celular (n=8) | 89-103 | 96 |
LINEALIDAD
Para evaluar la linealidad del ensayo, las muestras que contenían y/o estaban adicionadas con altas concentraciones de Humano 15-LO-2 en varias matrices se diluyeron con el diluyente de estándar de referencia y muestra para producir muestras con valores dentro del rango dinámico del ensayo.
