CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES
| Nombre completo | Transferrina |
|---|---|
| Sinónimo | TRF; Siderophilin; Serotransferrin; Beta-1 metal-binding globulin |
| Tipo de ensayo | Competitivo |
| Reactividad | Ratón |
| Rango | 12.35-1000ng/mL |
| Sensibilidad | 5.44ng/mL |
| Tipo de muestra | Suero, plasma y otros fluidos biológicos |
| Volumen de muestra | 50μL |
| Longitud de onda de detección | OD450 |
| Temperatura de transporte | 2-8°C |
| Especificidad | El kit detectó TF de ratón en las muestras y no se encontraron reacciones significativas entre especies. |
| Microplaca | 96-wells plate breakable into 12 x 8 wells strip |
PRINCIPIO DEL ENSAYO
| Este kit ELISA utiliza el principio de ELISA competitivo. La microplaca ELISA incluida en este kit ha sido prerrecubierta con TF de ratón. Durante la reacción, el TF de ratón presente en la muestra o el estándar compite con una cantidad fija de TF de ratón en el soporte de fase sólida por los sitios del anticuerpo de detección biotinilado específico para TF de ratón. El exceso de conjugado y la muestra o el estándar no unidos se eliminan por lavado, y se añade conjugado de avidina-peroxidasa de rábano picante (HRP) a cada pocillo de la microplaca y se incuba. A continuación, se añade una solución de sustrato TMB a cada pocillo. La reacción enzima-sustrato finaliza con la adición de la solución de parada y el color vira de azul a amarillo. La densidad óptica (DO) se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm ± 2 nm. La concentración de TF de ratón en las muestras analizadas se puede calcular comparando la DO de las muestras con la curva estándar. |
COMPONENTES DEL KIT ELISA
Al recibirlo, desempacar rápidamente y almacenar según lo recomendado en las instrucciones.
| Componentes | Especificaciones | Almacenamiento y notas |
|---|---|---|
| Microplaca | 96T: 8 wells×12 strips 48T: 8 wells×6 strips | No abierto: -20°C, 12 meses No utilizado: Devolverlo a la bolsa de papel aluminio y sellarla, almacenar a -20°C. |
| Estándar de referencia | 96T: 2 vials 48T: 1 vial | No abierto: -20°C, 12 meses Por favor, utilice estándares recién disueltos para cada experimento. Deseche cualquier estándar no utilizado después de la disolución. |
| Concentrado de anticuerpo de detección biotinilado (100×) | 96T: 120μL×1 vial 48T: 60μL×1 vial | No abierto: -20°C, 12 meses No utilizado: Por favor, sellar el concentrado y almacenarlo a -20°C, y desechar la solución de trabajo. |
| Concentrado de conjugado HRP (100×) | 96T: 120μL×1 vial 48T: 60μL×1 vial | No abierto: -20°C (Proteger de la luz), 12 meses No utilizado: Por favor, sellar el concentrado y almacenarlo a -20°C, y desechar la solución de trabajo. |
| Diluyente de anticuerpo de detección biotinilado | 14mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Diluyente de conjugado HRP | 14mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Diluyente de estándar de referencia y muestra | 20mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Concentrado de tampón de lavado (25×) | 30mL×1 | 2-8℃, 12 meses |
| Reactivo sustrato (TMB) | 10mL×1 | 2-8°C (Proteger de la luz), 12 meses |
| Solución de parada | 7mL×1 | 2-8°C/Temperatura ambiente |
PROCEDIMIENTOS DEL ENSAYO
DATOS TÍPICOS
Ratón TF Curva estándar ELISA
Los datos típicos son solo para referencia y las curvas deben volver a trazarse para cada experimento. Se recomienda la función logística para el ajuste.
PRECISIÓN
Precisión intra-ensayo (Precisión dentro de un ensayo): Se probaron tres muestras de concentración conocida veinte veces en una placa para evaluar la precisión intra-ensayo.
Precisión inter-ensayo (Precisión entre ensayos): Se probaron tres muestras de concentración conocida en veinte ensayos separados para evaluar la precisión inter-ensayo. Los ensayos fueron realizados por al menos tres técnicos utilizando dos lotes de componentes.
| Precisión intra-ensayo | Precisión inter-ensayo | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Muestra | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Media (ng/mL) | 52.21 | 100.65 | 397.52 | 50.69 | 96.43 | 384.27 |
| Desviación estándar | 2.81 | 4.14 | 12.68 | 3.54 | 3.9 | 16.98 |
| CV(%) | 5.39 | 4.11 | 3.19 | 6.99 | 4.04 | 4.42 |
RECUPERACIÓN
Se evaluó la recuperación de Ratón TF adicionado en tres niveles diferentes en muestras a lo largo del rango del ensayo en varias matrices.
| Tipo de muestra | Rango (%) | Recuperación promedio (%) |
|---|---|---|
| Suero(n=8) | 84-96 | 91 |
| Plasma EDTA (n=8) | 88-104 | 95 |
| Medio de cultivo celular (n=8) | 96-110 | 101 |
LINEALIDAD
Para evaluar la linealidad del ensayo, las muestras que contenían y/o estaban adicionadas con altas concentraciones de Ratón TF en varias matrices se diluyeron con el diluyente de estándar de referencia y muestra para producir muestras con valores dentro del rango dinámico del ensayo.
