1、 Intensidad de la señal
Inmunofluorescencia indirecta ordinaria (IF):
La intensidad de la señal es relativamente débil, especialmente al detectar antígenos de baja abundancia, puede no ser lo suficientemente sensible.
Inmunofluorescencia multicolor TSA:
Debido al efecto de amplificación de la señal de caseína, la intensidad de la señal se incrementa significativamente, permitiendo la detección de antígenos de baja abundancia y mejorando la sensibilidad de la detección.
2、 Principio
Inmunofluorescencia indirecta ordinaria (IF):
Primero, se añade el anticuerpo primario y se combina con el antígeno en la muestra para formar un complejo.
Luego se añade un anticuerpo secundario marcado fluorescentemente, que se une al anticuerpo primario, y se determina la presencia y abundancia de la sustancia a analizar mediante la detección de la señal de fluorescencia.
Inmunofluorescencia multicolor TSA:
Basado en la tecnología de amplificación de señal de caseína. Primero, se incuba el anticuerpo primario y luego se une al anticuerpo secundario correspondiente marcado con HRP al anticuerpo primario. Después, se añade caseína marcada con fluoresceína, y bajo la catálisis de la peroxidasa, la fluoresceína en la caseína se une covalentemente a las proteínas circundantes del anticuerpo secundario, amplificando enormemente la señal de fluorescencia.
Esta tecnología puede realizar múltiples rondas de tinción y, después de cada ronda de tinción, los anticuerpos de la ronda anterior se eliminan mediante un procesamiento específico, logrando una etiquetado multicolor de alta resolución de múltiples objetivos en la misma muestra.
3、 Complejidad operativa
Inmunofluorescencia indirecta ordinaria (IF):
La operación es relativamente simple y el proceso experimental es relativamente corto.
Inmunofluorescencia multicolor TSA:
La operación es relativamente compleja, requiriendo múltiples rondas de tinción y pasos de eliminación de anticuerpos, con altos requisitos técnicos y tiempos experimentales relativamente largos.
4、 Resolución
Inmunofluorescencia indirecta ordinaria (IF):
La resolución es relativamente baja y, para algunos tejidos o células de estructura fina, puede ser difícil distinguir claramente las diferentes distribuciones de antígenos.
Inmunofluorescencia multicolor TSA:
• Con alta resolución, puede mostrar la localización y distribución de diferentes objetivos en células o tejidos de manera más clara, lo cual es útil para investigaciones profundas sobre interacciones moleculares y relaciones espaciales dentro de las células.
5、 Capacidad de etiquetado multicolor
Inmunofluorescencia indirecta ordinaria (IF):
Aunque también es posible el etiquetado multicolor, el número de etiquetas multicolores suele estar limitado.
Inmunofluorescencia multicolor TSA:
Se pueden realizar múltiples rondas de tinción y, mediante un control preciso y amplificación de señal, se puede lograr una mayor cantidad de etiquetado por colores, mejorando enormemente la capacidad de etiquetado multicolor. Se pueden detectar simultáneamente múltiples objetivos diferentes, proporcionando información más rica para el estudio de procesos biológicos complejos.