Células de cáncer gástrico humano (no diferenciadas) HGC-27
La línea celular de cáncer gástrico humano HGC-27 es una línea celular de cáncer gástrico humano no diferenciada comúnmente utilizada para estudiar las características biológicas y los mecanismos relacionados del cáncer gástrico.
Aquí hay algunas información clave sobre la línea celular HGC-27:
1. Origen de las células y características: Las células HGC-27 se derivan de tejido de cáncer gástrico no diferenciado, con morfología epitelial y características de crecimiento adherente, y pueden secretar mucina. Estas células exhiben alta tumorigenicidad y han sido utilizadas como sujetos de investigación para células madre de cáncer gástrico (CSC) en algunos estudios [9,13,14].
2. Condiciones de cultivo: Las células HGC-27 se cultivan generalmente en medio RPMI-1640, suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS) y 1% de agente antibiótico antifúngico (P/S), e incubadas en un incubador a temperatura constante a 37℃ y 5% CO2. La proporción de pasaje es generalmente 1:2 a 1:5, y el medio de cultivo se cambia cada 2 a 3 días.
3. Congelación y Revitalización: Las células HGC-27 pueden congelarse utilizando una solución de congelación que contiene DMSO en condiciones de fase de vapor de nitrógeno líquido. Durante la revitalización, la solución congelada necesita ser derretida en un baño María a 37 ℃ y revitalizada según las instrucciones de operación.
4. Aplicación en investigación: Las células HGC-27 se utilizan ampliamente para estudiar el comportamiento biológico del cáncer gástrico, como proliferación, migración e invasión. Por ejemplo, estudios han demostrado que los inhibidores de miARN pueden inhibir efectivamente la capacidad de proliferación, migración e invasión de las células HGC-27 [2]. Además, las células HGC-27 se han utilizado para estudiar los efectos de los fármacos sobre las células de cáncer gástrico, como la pipерina regulando la proliferación y la invasión de las células HGC-27 mediante la regulación a la baja de la expresión de moléculas de señalización Wnt/β - catenina [10].
5. Seguridad y restricciones de uso: La línea celular HGC-27 es únicamente para fines de investigación científica y no puede utilizarse para tratamientos clínicos. Durante el proceso de producción y cultivo, es necesario controlar estrictamente las condiciones estériles y decidir si añadir antibióticos según la situación real.
6. Características especiales: Las células HGC-27 exhiben fuertes características de célula madre, capaces de formar esferoides tumorales y comunicarse con otras células a través de exosomas [9,13,14]. Además, las células HGC-27 han mostrado altas tasas de injerto y bajas tasas de metástasis en ciertos experimentos [11].
La línea celular HGC-27 es una herramienta importante para estudiar las características biológicas del cáncer gástrico y sus posibles dianas terapéuticas. Durante el uso, deben seguirse procedimientos estériles estrictos y pasos de congelación y recuperación para garantizar la fiabilidad y reproducibilidad de los resultados experimentales.
Los casos específicos de aplicación de la línea celular HGC-27 en investigación sobre cáncer gástrico incluyen los siguientes aspectos:
1. Investigación sobre capacidad de migración e invasión:
La línea celular HGC-27 se utilizó para evaluar la capacidad de migración e invasión de las células de cáncer gástrico. A través de experimentos de migración e invasión Transwell, los investigadores pudieron detectar la capacidad de migración e invasión de las células HGC-27 y analizar posteriormente la expresión de proteínas relacionadas con CD44 [19].
En otro estudio, las células HGC-27 se utilizaron para evaluar la capacidad de migración e invasión de las células bajo diferentes condiciones, incluyendo células tratadas con 5-Aza-CdR y TSA [20].
2. Investigación sobre expresión y función de miARN:
La línea celular HGC-27 se utilizó para investigar el papel del miARN en el cáncer gástrico. Por ejemplo, estudios han encontrado que los niveles de expresión de miR-433 y miR-127 son significativamente reducidos en las células HGC-27, y estos miARN pueden inhibir efectivamente la proliferación y el ciclo celular de las células tumorales [20].
En otro estudio, las células HGC-27 se utilizaron para evaluar la eficiencia de transfección de miméticos de miARN y miARN negativos de control, y la expresión de ARNm fue analizada mediante RT-PCR [20].
3. Investigación sobre resistencia a fármacos:
La línea celular HGC-27 se utilizó para estudiar la resistencia a fármacos en células de cáncer gástrico. Por ejemplo, estudios han encontrado que la alta expresión de proteína HCCR en las células HGC-27 está asociada con resistencia a 5-FU, y la expresión de HCCR es significativamente regulada hacia arriba en el subtipo resistente HGC-27-R [21].
4. Investigación metabólica:
La línea celular HGC-27 se utilizó para estudiar las características metabólicas de las células de cáncer gástrico. Por ejemplo, mediante la detección del consumo de glucosa y la producción de lactato, midiendo la tasa de consumo de oxígeno (OCR) y la tasa de acidificación extracelular (ECAR), los investigadores pueden evaluar el estado metabólico de las células HGC-27 [22].
5. Investigación sobre supresión tumoral:
La línea celular HGC-27 se utilizó para evaluar los efectos de diferentes estrategias de tratamiento sobre el crecimiento tumoral. Por ejemplo, la investigación ha encontrado que GQDs/Cy5-miR@sEVs puede inhibir efectivamente el crecimiento tumoral de las células HGC-27 y lograr este efecto mediante la diana del gen CCND1 de miR-193a-3p [23].
6. Estudio sobre el efecto inhibitorio de fármacos:
La línea celular HGC-27 se utilizó para evaluar el efecto inhibitorio de la análoga de curcumina CH-5 sobre las células de cáncer gástrico. La investigación ha encontrado que CH-5 puede inhibir efectivamente la proliferación, migración e invasión de las células HGC-27, indicando que podría convertirse en un fármaco potencial para el tratamiento del cáncer gástrico [24].
¿Cómo se identifican y validan las características de célula madre de la línea celular HGC-27?
Las características de célula madre de la línea celular HGC-27 se identifican y validan principalmente a través de los siguientes métodos experimentales:
1. Ensayo de formación de colonias: Durante la fase de crecimiento logarítmico, las células HGC-27 se digeran en una suspensión de células individuales y luego se añaden a placas de cultivo de 6 centímetros de diámetro, cada placa conteniendo 1 × 10 ^ 3 células. Después de 14 días de cultivo, se recogen los sobrenadantes, se lavan y fijan las colonias, y finalmente se tiñen con Giemsa. Se cuenta el número de colonias utilizando un microscopio óptico para calcular la eficiencia de formación de colonias. La formación de colonias es una característica importante de las células madre, ya que estas tienen la capacidad de autorrenovación y diferenciación, y pueden formar colonias multicelulares [7].
2. Análisis del ciclo celular: Recoger y lavar las células HGC-27 en fase de crecimiento logarítmico utilizando kits de análisis del ciclo celular y apoptosis, luego añadir el tampón de ioduro de proline en la oscuridad e incubarlo a 37℃durante 30 minutos antes de realizar inmediatamente el análisis de citometría de flujo. Al analizar la distribución del ciclo celular, se puede evaluar la capacidad de proliferación y las características de célula madre [7].
3. Experimento de gen reportero de fluoresceína: Según la predicción de Targeted ScanHuman 7.0, SOX4 podría ser una diana potencial del miR-140. Los fragmentos 3'UTR salvaje y mutante de SOX4 se sintetizan utilizando el Kit QuikChange Multi Site Directed Mutagenesis, se clonan en vectores gen reportero de luciferasa y se transfieren junto con miméticos o controles del miR-140. Después de 48 horas, la intensidad de fluorescencia es detectada mediante citometría de flujo. Este experimento puede verificar la expresión de SOX4 en las células HGC-27 y su relación con miR-140, reflejando indirectamente las características de célula madre [7].
4. PCR cuantitativo en tiempo real (qPCR): El ARN total y el miARN se extraen utilizando reactivos RNAiso o TRIzol, y luego son transcritos inversamente en ADN complementario (cDNAs). Utilizar cebadores específicos para qPCR, dirigiéndose a miR-140 y otros genes de prueba, con U6 y GAPDH como genes de referencia internos. El experimento se repitió tres veces, y los datos fueron analizados utilizando el método 2 ^ - DCDt. Los experimentos de qPCR pueden analizar cuantitativamente los niveles de expresión de genes específicos, evaluando así la expresión de genes relacionados con célula madre [7].
5. Experimento Western blot: Las proteínas se extraen después de la lisis celular, se separan mediante SDS-PAGE, se transfieren a membrana PVDF y se someten a análisis inmunoblotting con anticuerpos específicos. Los experimentos Western blot pueden detectar los niveles de expresión de proteínas específicas, verificando ulteriormente la expresión de proteínas relacionadas con célula madre.
¿Cómo afectan específicamente los inhibidores de miARN a la proliferación, migración e invasión de las células HGC-27?
Los inhibidores de miARN tienen un impacto significativo sobre la proliferación, migración e invasión de las células HGC-27. Específicamente:
1. Proliferación:
La inhibición de omiR-191 y miR-425 reduce significativamente la capacidad de proliferación de las células HGC-27. A través de experimentos CCK-8, se encontró que la proliferación de las células HGC-27 fue reducida significativamente después del tratamiento con inhibidores de miR-191 y miR-425 [2].
La inhibición de omiR-217 también promovió significativamente la proliferación de las células HGC-27 [25].
2. Migración:
La inhibición de omiR-191 y miR-425 reduce significativamente la capacidad de migración de las células HGC-27. En el experimento de cicatrizado artificial, la inhibición de estos dos miARN redujo significativamente la migración celular [2].
La inhibición de omiR-217 también redujo la capacidad de migración de las células HGC-27 [25].
3. Invasión:
La inhibición de omiR-191 y miR-425 reduce significativamente la capacidad invasiva de las células HGC-27. A través de experimentos de invasión Transwell, se encontró que inhibir estos dos miARN redujo significativamente la invasión celular [2].
La inhibición de omiR-217 también redujo significativamente la capacidad invasiva de las células HGC-27 [25].
Los inhibidores de miARN afectan la proliferación, migración e invasión de las células HGC-27 a través de diferentes mecanismos. La inhibición de miR-191 y miR-425 se manifiesta principalmente reduciendo la proliferación celular y migración, mientras que aumenta la proporción de la fase S del ciclo celular [2]. La inhibición de miR-217 se manifiesta como promover la proliferación celular y reducir la migración e invasión celular [25].
¿Cuál es el mecanismo específico mediante el cual la pipерina regula la proliferación e invasión de las células HGC-27 a través de moléculas de señalización Wnt/β - catenina?
El mecanismo específico mediante el cual la pipерina regula la proliferación e invasión de la línea celular de cáncer gástrico HGC-27 a través de moléculas de señalización Wnt/β - catenina es el siguiente:
1. Proliferación celular y viabilidad:
La dosis baja de pipерina (5 μmol·L^-1) tiene un efecto significativo sobre la proliferación y viabilidad de las células HGC-27. La investigación ha mostrado que 5 μmol·L^-1 pipерina puede reducir significativamente la tasa de proliferación y viabilidad de las células HGC-27 después de 12, 24 y 48 horas, pero sin citotoxicidad significativa [10]. Esto indica que la pipерina inhibe la proliferación de las células HGC-27 mediante la supresión de la señalización Wnt/β-catenina.
2. Capacidad de migración e invasión celular:
Los resultados del ensayo de rasguño y la prueba de cámara Transwell mostraron que 5 μmol·L^-1 pipерina puede reducir significativamente la capacidad de migración e invasión de las células HGC-27 [10]. Estos resultados indican que la inhibición de la señalización Wnt/β-catenina puede reducir efectivamente el comportamiento de migración e invasión celular.
3. Expresión de moléculas de señalización Wnt/β - catenina:
La pipерina regula significativamente hacia abajo la expresión de moléculas de señalización Wnt/β-catenina, incluyendo β-catenina, MMP2, MMP9 y N-cadherina [10]. Los resultados de RT qPCR y Western blot mostraron que los niveles de ARNm y proteína de estas proteínas clave fueron significativamente menores en el grupo experimental comparado con el grupo normal y el grupo control (grupo inhibidor Wnt/β-catenina), confirmando ulteriormente que la pipерina regula el comportamiento celular mediante la regulación a la baja de moléculas de señalización Wnt/β-catenina [10].
Resumen del mecanismo:
En resumen, la pipерina de baja dosis inhibe significativamente la proliferación, migración e invasión de la línea celular de cáncer gástrico HGC-27 mediante la regulación a la baja de la expresión de moléculas de señalización Wnt/β-catenina. Este mecanismo puede ser una de las vías importantes para el efecto anti-tumoral de la pipерina [10].
Referencia:
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