Etiqueta de epítopo

Etiqueta Epítope

Las etiquetas epítopo son útiles para la detección y marcado de proteínas mediante técnicas de inmunotransferencia, inmunoprecipitación e inmunomarcado. Debido a su pequeño tamaño, es poco probable que afecten las propiedades bioquímicas de la proteína marcada.

Varias etiquetas epítopo diferentes se utilizan comúnmente y están disponibles fácilmente. Por ejemplo, una variedad de plásmidos contiene ADN que codifica una etiqueta amino-terminal consistente en seis residuos de histidina (6xHis) seguida de un sitio de clonación múltiple extendido. La etiqueta 6xHis en las proteínas recombinantes expresadas permite el acoplamiento eficiente a resinas de afinidad Ni2+ y la purificación por cromatografía de un solo paso (1). Al igual que ocurre con otros sistemas de etiquetas de proteínas (2), esta poli-histidina puede ser cortada frecuentemente en sitios reconocidos por proteasas como trombina y enterokinases para aislar la proteína de interés (1). La Glutatió S-transferasa (GST) es otro socio de fusión ampliamente utilizado, ya que proporciona una etiqueta fácilmente detectable y un proceso de purificación simple con poco efecto sobre la función biológica de la proteína de interés. Se han desarrollado numerosos vectores que contienen GST-Tag para sistemas tanto procarióticos como eucariotas en las últimas década (3-5). La etiqueta HA, derivada de un epítope de la proteína hemaglutinina de la influenza, también se ha utilizado extensamente como una etiqueta epítopo general en vectores de expresión (6), mientras que la etiqueta epítope Myc se utiliza rutinariamente para detectar la expresión de proteínas recombinantes en sistemas celulares bacterianos, de levadura, insectos y mamíferos (7). Finalmente, el péptido DYKDDDDK ha sido utilizado extensamente como una etiqueta epítopo general en vectores de expresión y consiste en solo ocho aminoácidos. Este péptido puede expresarse y detectarse con la proteína de interés como una fusión amino-terminal o carboxi-terminal (8).

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