Las condiciones de recolección y almacenamiento de muestras para ELISA listadas a continuación se destinan como directrices generales. Los protocolos específicos pueden variar según el tipo de línea celular o tejido. Si se almacenan muestras por un tiempo prolongado, se recomienda probar la estabilidad de las mismas. Evite ciclos repetidos de congelación-descongelación para todos los tipos de muestra.
Suero
Utilice un tubo separador de suero (SST) y permita que las muestras coagulen durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de centrifugarlas durante 15 minutos a 1000 x g. Elimine el suero y realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
Plasma
Recolecte el plasma utilizando EDTA, heparina o citrato como anticoagulante. Centrifugue durante 15 minutos a 1000 x g dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección. Realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
Plasma pobre en plaquetas
Recolecte el plasma utilizando EDTA, heparina o citrato como anticoagulante. Centrifugue durante 15 minutos a 1000 x g dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección. Se recomienda un paso adicional de centrifugación del plasma a 10.000 x g durante 10 minutos a 2-8 °C para una eliminación completa de plaquetas. Realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
Sobrenadantes de Cultivo Celular
Elimine partículas mediante centrifugación a 500 x g durante 5 minutos. Elimine el sobrenadante y realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
Homogeneizados Tisulares
La preparación de homogeneizados tisulares variará dependiendo del tipo de tejido. Enjuague el tejido con 1X PBS para eliminar el exceso de sangre, homogenice en 20 mL de 1X PBS y almacene durante la noche a ≤ -20 °C. Después de realizar dos ciclos de congelación-descongelación para romper las membranas celulares, los homogeneizados se centrifugaron durante 5 minutos a 5000 x g. El sobrenadante fue eliminado inmediatamente y ensayado. Alternativamente, fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
Lisados Celulares
Solubilice la célula en un tampón lisis y permita que repose sobre hielo durante 30 minutos. Centrifugue los tubos a 14.000 x g durante 5 minutos para eliminar el material insoluble. Fraccione el sobrenadante en un nuevo tubo y deseche el extracto celular restante cuantifique la concentración total de proteína utilizando un ensayo de proteínas totales. Realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene a ≤ -20 °C.
Lisados Tisulares
Enjuague el tejido con PBS, córtelo en piezas de 1-2 mm y homogenice con un homogeneizador tisular en PBS. Añada un volumen igual de tampón RIPA que contenga inhibidores de proteasas y lisar los tejidos a temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación suave. Centrifugue para eliminar desechos. Cuantifique la concentración total de proteína utilizando un ensayo de proteínas totales. Realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene a ≤ -20 °C.
Saliva
Recolecte la saliva en un tubo y centrifugue durante 5 minutos a 10.000 x g. Recoja la capa acuosa, ensaye inmediatamente o fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
Orina
Recolecte asépticamente la primera orina del día (flujo medio), evacuada directamente en un contenedor estéril. Centrifugue para eliminar materia particulada. Realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
Leche Humana
Centrifugue durante 15 minutos a 1000 x g a 2-8 °C. Recoja la fracción acuosa y repita este proceso un total de 3 veces. Realice el ensayo inmediatamente o fraccioné y almacene las muestras a ≤ -20 °C.
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