La inmunohistoquímica tradicional se basa en sustratos cromogénicos para la detección cualitativa, mientras que el IF convencional depende de la marcación fluorescente directa. Aunque parecen maduros, estos métodos tienen obstáculos técnicos insuperables en la detección de objetivos de baja abundancia, la colocalización de múltiples marcadores y la adaptación a diversos tipos de muestras.
Este artículo describe sistemáticamente los escenarios de aplicación específicos y el valor clínico de la tecnología de inmunotinción múltiple en la investigación del microambiente inmunitario tumoral, combinado con múltiples ejemplos de investigación.
Este estudio introduce la tecnología de amplificación por señalización con tiramina (TSA) de inmunofluorescencia múltiple (mIF), con el objetivo de superar las limitaciones de las técnicas tradicionales de detección y establecer un sistema técnico estandarizado que permita la detección simultánea de múltiples marcadores, la clasificación precisa de células inmunitarias y el análisis de atlas espaciales en una sección única de tejido tumoral incrustado en parafina, proporcionando soporte técnico confiable para investigaciones profundas sobre el microambiente inmunológico del tumor, el descubrimiento de biomarcadores inmunológicos y la implementación de inmunoterapia personalizada.
La homeostasis redox denota el mantenimiento del equilibrio entre los oxidantes y los antioxidantes. Aunque la producción excesiva de oxidantes causa daños oxidativos a las biomoléculas celulares y da como resultado una crisis oxidativa, la falta de niveles adecuados de oxidantes compromete los procesos de señalización cruciales y da como resultado una crisis reductora.
Al combinar la estructura molecular única de SNAP25 —una región intrínsecamente desordenada grande entre los dos motivos SNARE, con cisteínas en la región del enlace que pueden sufrir modificación por palmitoilación— y las conclusiones experimentales previas según las cuales la Sintaxina-1 mejora la palmitoilación de SNAP25, los autores propusieron una hipótesis científica completa: SNAP25 experimenta separación líquido-líquido a través de su región desordenada, con la modificación por palmitoilación y la Sintaxina-1 regulando conjuntamente la formación del condensado. Las gotas producidas mediante separación pueden reclutar todos los componentes SNARE para promover el ensamblaje del complejo ternario. Las mutaciones patógenas DEE interrumpen la separación y bloquean la vía de fusión de membrana, llenando así completamente el vacío en la investigación sobre el mecanismo de agregación de proteínas SNARE.
En campos como la investigación patológica, los estudios del microambiente tumoral y el cribado de biomarcadores, la inmunofluorescencia múltiple (mIHC) ha surgido como la tecnología central para la detección precisa in situ de proteínas.
The familia Bcl-2 está compuesta por varias proteínas conservadas evolutivamente que contienen dominios de homología a Bcl-2 (BH) y regulan la apoptosis mediante el control de la permeabilidad de la membrana mitocondrial y la liberación del citocromo c. Se han identificado cuatro dominios BH (BH1-BH4) que median interacciones proteicas. La familia puede separarse en tres grupos basándose en su función y homología de secuencia: los miembros pro-supervivencia incluyen Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1, A1 y Bcl-w; las proteínas pro-apoptóticas incluyen Bax, Bak y Bok; y las proteínas "BH3 only" son Bad, Bik, Bid, Puma, Bim, Bmf, Noxa y Hrk. Las interacciones entre los miembros de la familia Bcl-2 promotores de muerte y supresores de muerte han llevado al desarrollo de un modelo de reóstato en el que la relación entre proteínas pro-apoptóticas y anti-apoptóticas controla el destino celular. Por lo tanto, los miembros pro-supervivencia ejercen su comportamiento mediante la unión a los miembros promotores de muerte y su antagonismo. En general, los "miembros BH3-only" pueden unirse y antagonizar las proteínas pro-supervivencia, provocando un aumento de la apoptosis. Si bien existe probablemente cierta redundancia en este sistema, la especificidad tisular y la regulación transcripcional y post-traduccional de muchos de estos miembros de la familia pueden explicar roles fisiológicos distintos.
La apoptosis es un proceso fisiológico regulado que conduce a la muerte celular. Las caspasas, una familia de proteasas cisteínicas ácidas, son reguladores centrales de la apoptosis. Las caspasas iniciadoras (incluidos los números 2, 8, 9, 10 y 12) están estrechamente acopladas a las señales proapoptóticas, que incluyen FasL, TNF-α y daño en el ADN. Una vez activadas, estas caspasas clivan y activan las caspasas efectoras aguas abajo (incluidos los números 3, 6 y 7), las cuales a su vez clivan proteínas citoesqueléticas y nucleares como PARP, α-fodrina, DFF y lamina A, e inducen la apoptosis.
