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En la investigación moderna de ciencias de la vida, la complejidad de los microambientes tisulares plantea mayores demandas para el estudio científico. La tecnología de inmunofluorescencia multiplex (mIHC), con sus ventajas de detección simultánea de múltiples objetivos y preservación de información espacial, se ha convertido en una herramienta indispensable en campos como la inmunología tumoral, las neurociencias y la investigación de células madre.

En las últimas décadas, la inmunohistoquímica (IHC) ha sido la herramienta estándar para la investigación del tejido tumoral: desde HER2 y Ki-67 hasta PD-L1, ha permitido a investigadores y patólogos visualizar claramente la distribución de proteínas individuales en los tejidos. Sin embargo, con la entrada de la investigación del cáncer en la "era de la biología espacial", la información proporcionada por marcadores únicos está lejos de ser suficiente.

Este estudio combinó la tinción por pasos secuenciales con tecnología de detección de amplificación por tiramida, estableciendo exitosamente un sistema de tinción inmunofluorescente multiplex adecuado para plataformas de tinción completamente automatizadas, superando así la barrera técnica que impide a las tinciones automatizadas tradicionales el uso de anticuerpos primarios de la misma especie para detección multianálisis.

Este artículo detalla el mecanismo de activación, la modificación por fosforilación de proteínas clave y la regulación transcripcional de la vía de señalización NF-κB. En el citoplasma, NF-κB permanece inactivo al unirse a las proteínas inhibidoras IκB. El complejo IKK fosforila IκBα, IκBβ e IκBε, desencadenando su ubiquitinación y degradación proteosómica. Los dímeros de NF-κB liberados luego se translocan al núcleo para ejecutar funciones transcripcionales. La familia de NF-κB en mamíferos está compuesta por cinco miembros: p65/RelA, c-Rel, RelB, NF-κB1 y NF-κB2. Tras el procesamiento proteolítico, las proteínas precursoras forman dímeros con proteínas Rel para unirse al ADN. Múltiples sitios de fosforilación modulan la actividad transcripcional de p65. Este documento también lista anticuerpos comerciales para investigaciones sobre esta vía, junto con su reactividad en especies y técnicas experimentales aplicables, así como referencias relevantes, proporcionando una guía para investigación básica y detección experimental de la vía NF-κB.

La familia de factores nucleares κB (NF-κB) participa extensamente en las respuestas inflamatorias e inmunológicas. Distintamente del pathway canónico de NF-κB activado por TNFα y LPS, el pathway no canónico es desencadenado por BAFF, CD40L y otros estimulos. Este pathway se basa en la quinasa inducida por NF-κB (NIK) e IKKα para mediar la fosforilación y la degradación proteasomal parcial de p100 de NF-κB2 en p52 activo. TRAF2 y TRAF3 actúan como reguladores negativos en este proceso. El pathway no canónico de NF-κB es esencial para la maduración de células B, la formación de tejidos linfoides periféricos y la prevención de enfermedades autoinmunes. Este artículo también lista una serie de anticuerpos específicos para detección de proteínas relacionadas, junto con referencias de investigación relevantes.

¿Cuáles son las diferencias entre la inmunohistoquímica tradicional (IHC) y la inmunohistoquímica multiplexada (mIHC)?

La principal diferencia radica en el número de marcadores que pueden analizarse simultáneamente en una misma muestra de tejido. La IHC convencional permite visualizar un solo marcador o, como máximo, dos por sección, mientras que la mIHC tiene la capacidad de detectar y cuantificar múltiples proteínas (generalmente entre 4 y 10) al mismo tiempo utilizando canales espectrales.

¿Por qué están eligiendo cada vez más estudios el uso de la mIHC?

Motivo principal es la necesidad de caracterizar la heterogeneidad tumoral y el microambiente tumoral (TME) con mayor precisión. La mIHC permite:

• Economizar muestras biológicas valiosas al obtener información multidimensional en una sola sección.
• Análisis cuantitativo preciso de la abundancia celular y su expresión proteica.
• Inferencia espacial de las interacciones entre diferentes tipos celulares (células inmunitarias, células tumorales, fibroblastos), lo cual es crucial para entender la biología del cáncer y desarrollar inmunoterapias.

En los últimos años, la inmunohistoquímica multiplex (mIHC), con su capacidad para detectar simultáneamente múltiples marcadores y analizar información espacial, se ha convertido en una herramienta importante para la investigación del microambiente tumoral, la evaluación de la inmunoterapia y los estudios de patología espacial. Sin embargo, comparado con la IHC tradicional, el flujo experimental de mIHC es más complejo. Desde la selección de anticuerpos hasta el diseño de paneles, pasando por la tinción TSA y el análisis de imágenes, cada paso puede afectar el resultado final.

Con el rápido desarrollo de la investigación del microambiente tumoral, la biología espacial y el diagnóstico patológico de precisión, la inmunofluorescencia multiplex (mIHC) se ha convertido en una herramienta importante para el análisis de muestras tisulares. En comparación con la inmunohistoquímica tradicional (IHQ) y la inmunofluorescencia convencional (IF), el mIHC permite la detección simultánea de múltiples marcadores proteicos en la misma sección tisular, lo que facilita la identificación del fenotipo celular, el análisis de localización espacial y los estudios de interacciones célula-célula.

1. Las proteínas adaptadoras multifuncionales denominadas TRAF (factores asociados a receptores de TNF) se unen a receptores superficiales y reclutan proteínas adicionales para formar complejos de señalización multiproteica capaces de promover respuestas celulares.
2. Los miembros de la familia TRAF comparten un dominio carboxiterminal común llamado "dominio TRAF", el cual media las interacciones con las proteínas asociadas; muchos también contienen motivos de dedo zinc/amino terminal.
3. Los primeros TRAF identificados, TRAF1 y TRAF2, fueron descubiertos gracias a sus interacciones con el dominio citoplasmático del receptor 2 de TNF (TNFRII).
4. Los seis TRAF conocidos (TRAF1-6) actúan como proteínas adaptadoras para una amplia gama de receptores de superficie celular y participan en la regulación de la supervivencia, proliferación, diferenciación y respuestas al estrés.

La heterogeneidad de las CAF no está impulsada por variaciones genéticas, como mutaciones génicas o anomalías cromosómicas, sino que depende de la reprogramación transcripcional y el remodelado epigenético, regulados dinámicamente por múltiples factores que incluyen el estado de mutación de las células tumorales, las señales del microambiente, la localización espacial y el estado del huésped. Su plasticidad se manifiesta como diferentes subpoblaciones de CAF que experimentan interconversión fenotípica y funcional con el progreso tumoral y los cambios ambientales, participando ampliamente en todo el proceso de evasión inmune tumoral, remodelado estromal, angiogénesis, infiltración neural y resistencia al tratamiento. Por tanto, analizar sistemáticamente las características estratificadas de la heterogeneidad de CAF, los mecanismos reguladores de la plasticidad y aclarar su papel en la terapia tumoral tiene un valor académico significativo e importancia clínica para el desarrollo de estrategias anti-tumor dirigidas estromales precisas y para superar los cuellos de botella del tratamiento de tumores sólidos.