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Anticuerpo de la familia Bcl-2 pro-apoptótica

La familia Bcl-2 se compone de varias proteínas conservadas evolutivamente que contienen dominios de homología de Bcl-2 (BH) y regulan la apoptosis mediante el control de la permeabilidad de la membrana mitocondrial y la liberación del citocromo c. Se han identificado cuatro dominios BH (BH1-BH4) que median las interacciones proteicas. La familia puede dividirse en tres grupos según su función y homología de secuencia: los miembros pro-supervivencia incluyen Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1, A1 y Bcl-w; las proteínas pro-apoptóticas incluyen Bax, Bak y Bok; y las proteínas "BH3 only" Bad, Bik, Bid, Puma, Bim, Bmf, Noxa y Hrk. Las interacciones entre los miembros de la familia Bcl-2 que promueven la muerte y aquellos que suprimen la muerte han llevado a un modelo de reóstato en el que la proporción de proteínas pro-apoptóticas y anti-apoptóticas controla el destino celular (4). Por lo tanto, los miembros pro-supervivencia ejercen su comportamiento uniéndose y antagonizando a los miembros promotores de la muerte. En general, los "miembros BH3-only" pueden unirse y antagonizar las proteínas pro-supervivientes llevando al aumento de la apoptosis. Aunque probablemente exista cierta redundancia en este sistema, la especificidad tisular, la regulación transcripcional y post-traduccional de muchos de estos miembros familiares puede explicar roles fisiológicos distintos.

La sinapsis es la unidad de transferencia de información en el cerebro entre neuronas. La transferencia sináptica se inicia por la fusión de vesículas sinápticas impulsada por potenciales de acción en el terminal presináptico para liberar neurotransmisores. El complejo molecular básico que impulsa todos los eventos de fusión de membrana en todas las células incluye proteínas receptoras del factor sensible a N-etilmaleímida (SNARE) que forman un complejo trans-ternario entre las membranas por fusionarse. La "acercamiento" o entrelazado de las proteínas SNARE proporciona la energía necesaria para la fusión de membranas. En la sinapsis, las proteínas SNARE incluyen la proteína asociada a sinaptosomas de 25 kDa (SNAP25), la sintaxina 1A (STX1A) y la proteína asociada a vesícula membranosa 2 (VAMP2, también denominada sinaptobreína). La liberación de neurotransmisores, sin embargo, es un proceso altamente regulado que ocurre en respuesta al influxo de Ca2+ impulsado por el potencial de acción. La regulación de la fusión de vesículas sinápticas está mediada por proteínas asociadas a SNARE, como la complejina y la proteína sináptica asociada a Ca2+, la sinaptotagmina-1, que funcionan cooperativamente para iniciar la fusión de vesículas sinápticas inducida por Ca2+. El ciclo de la vesícula sináptica representa un ciclo de eventos que preparan la vesícula sináptica antes de la fusión y recuperan la membrana fusionada tras la fusión completa. Las proteínas asociadas a vesículas sinápticas, como la sinapsina-1 y la sinapsifisina, así como las proteínas de la membrana diana, como Munc18-1, desempeñan un papel complejo en el primado de las vesículas sinápticas para hacerlas competentes para fusionarse.

La clave de la lisado celular radica en equilibrar la violencia y la suavidad, garantizar la integridad proteica y proporcionar una base fiable para el análisis posterior.

AMPK es un complejo heterotrimérico compuesto por una subunidad catalítica α y subunidades regulatorias β y γ, cada una de las cuales está codificada por dos o tres genes distintos (α1, 2; β1, 2; γ1, 2, 3). La quinasa se activa por un aumento en la relación AMP/ATP debido al estrés celular y ambiental, como el choque térmico, la hipoxia y la isquemia. El supresor tumoral LKB1 fosforila a AMPKα en Thr172 dentro del bucle de activación, y esta fosforilación es necesaria para la activación de AMPK. Las evidencias acumuladas indican que AMPK no solo regula el metabolismo de los ácidos grasos y el glucógeno, sino que también modula la síntesis de proteínas y el crecimiento celular a través de las vías EF2 y TSC2/mTOR, así como el flujo sanguíneo mediante eNOS/nNOS.

Los proteínas del grupo poliglobina (PcG) contribuyen al mantenimiento de la identidad celular, a la autorrenovación de células madre y a la regulación del ciclo celular, así como a la oncogénesis, mediante el mantenimiento del estado silenciado de los genes que promueven la especificación de linajes celulares, la muerte celular y la detención del ciclo celular. Los proteínas PcG existen en dos complejos que cooperan para mantener el silenciamiento génico a largo plazo mediante modificaciones epigenéticas del cromatina. El primer complejo, Eed-Ezh2, es reclutado a los genes por factores de transcripción unidos al ADN y metila la histona H3 en Lisina 27. Esta actividad de histona metiltransferasa requiere las subunidades Ezh2, Eed y Suz12 del complejo. La metilación de Lisina 27 facilita el reclutamiento del segundo complejo, PRC1, que ubiquitina la histona H2A en Lisina 119. El PRC1 está compuesto por Bmi1 y RING1A (también RING1 o RNF1), los cuales actúan para potenciar la actividad de ligasa E3 de ubiquitina de una subunidad catalítica adicional, RING1B (también RING2 o RNF2). Los proteínas PcG juegan un papel importante en la regulación de la proliferación celular y el envejecimiento mediante la represión de los genes p16 INK4A y p19 ARF, y son necesarios para el mantenimiento de las células madre hematopoyéticas y neurales adultas, así como de las células madre embrionarias.

La fosfolipasa C específica de fosfoinositídeos (PLC) desempeña un papel fundamental en la señalización transmembrana. En respuesta a estímulos extracelulares, como hormonas, factores de crecimiento y neurotransmisores, el PLC hidroliza el fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP2) para generar dos mensajeros secundarios: inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) y diacilgliceroles (DAG). Se han identificado al menos cuatro familias de PLCs: PLCβ, PLCγ, PLCδ y PLCε. La fosforilación es uno de los mecanismos clave que regulan la actividad del PLC. El PLCγ se activa tanto por quinasas tirosina receptoras como no receptoras. El PLCγ forma un complejo con receptores de EGF y PDGF, lo cual conduce a la fosforilación del PLCγ en Tyr771, 783 y 1248. La fosforilación por Syk en Tyr783 activa la actividad enzimática del PLCγ1. El PLCγ2 está implicado en la señalización dependiente de antígeno en células B y en la señalización dependiente de colágeno en plaquetas. La fosforilación por Btk o Lck en Tyr753, 759, 1197 y 1217 se correlaciona con la actividad del PLCγ2.

En los últimos años, en campos de investigación como la inmunología tumoral, las infecciones y la inflamación, así como las neurociencias, un número creciente de comentarios de revisores ha comenzado a incluir una palabra clave común: «información espacial insuficiente». Muchos investigadores se encuentran confundidos: han realizado pruebas de Western blot, qPCR e incluso secuenciación de células simples, y sin embargo aún se les pide complementar con evidencia a nivel espacial. El problema central radica en una transformación importante que están experimentando las ciencias de la vida modernas: el enfoque de la investigación ya no es simplemente «si algo se expresa» o «cuánto se expresa», sino «dónde se expresa» y «con quién coexiste». Este salto cognitivo desde moléculas hacia estructuras ha hecho gradualmente que la información espacial se convierta en una dimensión clave dentro del sistema de evaluación de artículos, y la tecnología de inmunofluorescencia multiplex TSA ha emergido como una herramienta importante para conectar las moléculas con las estructuras tisulares en este contexto.

A diferencia de la inmunotinción fluorescente tradicional, el sistema TSA no solo intensifica la intensidad de fluorescencia, sino que logra la "deposición tisular" de las señales mediante catálisis enzimática, cambiando fundamentalmente la forma de existencia de la señal y la lógica de detección, lo que permite sistemas de detección in situ para tejidos con hasta 5-8 colores o incluso dimensiones superiores.

La Na,K-ATPasa es un dímero integral de membrana que pertenece a la familia de las ATPasas del tipo P. La fosforilación de la Na,K-ATPasa en el residuo Tyr10 se ha relacionado con la regulación de la actividad enzimática en respuesta a hormonas y neurotransmisores. Las cadherinas son una superfamilia de glicoproteínas transmembrana que contienen repeticiones de cadherina de aproximadamente 100 residuos en su dominio extracelular. Las cadherinas median la adhesión célula-célula dependiente de calcio y desempeñan roles críticos en el desarrollo normal de los tejidos. La subfamilia clásica de cadherinas incluye N-, P-, R-, B- y E-cadherina, así como unos diez miembros adicionales que se encuentran en las uniones adherentes, una estructura celular cerca de la superficie apical de las células epiteliales polarizadas. El 4F2hc es una proteína transmembrana que pertenece a la familia de portadores de solutos. El 4F2hc forma complejos heterodiméricos con varios transportadores de aminoácidos, como LAT1 y LAT2, y regula la captación de aminoácidos. Las proteínas integrales de 21-24 kDa, las caveolinas, son los componentes estructurales principales del microdominio de la membrana plasmática enriquecido con colesterol/fosfolípidos llamado caveola. Se han identificado tres miembros de la familia de caveolina (caveolina-1, -2 y -3) con diferentes distribuciones tisulares. La ectonucleotidasa pirofosfatasa-fosfodiesterasa 1 (ENPP1) es una proteína transmembrana de paso simple principalmente implicada en la hidrólisis de ATP en la membrana plasmática. El ENPP1 desempeña roles importantes en la mineralización ósea y la calcificación de tejidos blandos.

Hoy, le proporcionaremos una comprensión integral de esta tecnología revolucionaria desde las perspectivas de los principios técnicos, el flujo experimental, los casos de aplicación y el análisis de ventajas.